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猪圆环病毒疫苗及配套诊断技术的研究与产业化
日期:2014-04-02 


  主要完成单位: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
  主要完成人员:刘长明、危艳武、陆月华、张超范、黄立平、郭龙军
  起 止  时 间: 2006年1月—2010年12月
  获 奖  情 况: 2012-2013年度中华农业科技奖三等奖
  内 容  提 要
  猪圆环病毒2型(PCV2)引起断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、先天性震颤等疾病,发病率10%~40%,死亡率达40%,造成更大经济损失,疫苗免疫是控制本病的关键。由于该病毒不易适应体外细胞培养,抗原产量低,免疫效力评价难等问题,使疫苗研制遇到挑战。本研究采用分子病毒学技术,构建了带有分子标签的重组毒株,以基因克隆毒株在体外培养获得成功,经过疫苗生产工艺、质量标准评价等技术取得突破,研制成功我国首例猪圆环病毒疫苗,种毒获得发明专利证书,产品获得新兽药二类证书,疫苗实现了产业化,解决了猪圆环病毒病防控难题。主要创新点:
  (1)对我国猪群进行了PCV2流行病学调查,将其分为PCV2a、PCV2b和PCV2d三个亚型,各占15.8%、73.7%和10.5%。攻克了病毒体外不易培养、抗原产量低的难题;建立了限制性片段长度多态性分析法,可对流行毒株分型鉴别。
  (2)采用基因操作技术,构建了带有分子标记的PCV2重组毒株,其可与野生型毒株相鉴别,获得国家发明专利。疫苗生产工艺取得突破,在病毒增殖过程中添加了D-氨基葡萄糖,使病毒培养滴度显著提高;筛选到一种理想的疫苗佐剂,大幅度地提高了疫苗刺激产生抗体应答能力。
  (3)研制的疫苗具有安全性好,对任何品种及不同年龄猪只无不良反应,免疫攻毒保护率达96%以上,免疫期6个月,批准为国家二类新兽药证书。在175个规模化猪场临床试验,猪群死淘率降低8%,出栏提早5~7天,保健用药减少30%,每头猪增收50元;各项指标优于进口产品,售价仅为其1/3。
  (4)疫苗实现了产业化,在2家企业建立了疫苗生产线,在病毒细胞培养、半成品检验、病毒灭活、疫苗乳化、成品疫苗检验、分装及标签设计等工艺取得创新。疫苗全国推广应用,接种后能够显著改善猪场的生产性能,各阶段猪只生长速度、成活率及饲料利用率显著提高,发病率和死淘率明显下降,创造巨大经济效益。
  (5)利用重组PCV2-Cap蛋白及其单克隆抗体技术,建立了间接和阻断ELISA用于血清抗体检测,荧光定量PCR法用于病毒核酸载量检测,这几种诊断技术为疫苗免疫效果评价提供了技术支撑。推广应用:本成果已获得新兽药证书1项,授权2家企业规模化生产,投放市场以来累计新增利润13369.88万元,税收1275.15万元。疫苗荣获2010年度重大农业科技产业化进步奖,2011年中国生猪业风云榜年度产品奖。



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